其他/Pharmacia Percoll 細胞分離液 1L 分子生物試劑
簡(jiǎn)要描述:其他/Pharmacia Percoll 細胞分離液 1LPercoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度,采用預先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數分至數十分鐘內達到滿(mǎn)意的細胞分離結果。
產(chǎn)品型號: 17-0891-01
所屬分類(lèi):其他
更新時(shí)間:2024-03-01
廠(chǎng)商性質(zhì):代理商
低價(jià)供應細胞分離液Pharmacia*Percoll 現貨 原裝*1L/分裝*100ML
產(chǎn)品名稱(chēng):細胞分離液;Percoll
貨號:17-0891-01
品牌:Pharmacia
用途:不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞
保存條件: 2-8度
供應細胞分離液Pharmacia Percoll 說(shuō)明書(shū):
一、 原理
Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度,采用預先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數分至數十分鐘內達到滿(mǎn)意的細胞分離結果。由于Percoll擴散常數低,所形成的梯度十分穩定。此外,Percoll不穿透生物膜,對細胞無(wú)毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
二、操作方法及注意事項
1.不同濃度(密度)Percoll溶液的制備: 先用9份Percoll與1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。
Percoll濃度(%) 70 60 50 40 30 20
比重g/ml 1.090 1.077 1.067 1.056 1.043 1.031
2.不連續密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩沿管壁流下,使形成滿(mǎn)意的界面。在制備過(guò)程中一般用長(cháng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時(shí)相鄰兩層Percoll比重相差不大時(shí),可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
3.裝樣:樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異,一般加樣體積不宜過(guò)大,細胞濃度也不可過(guò)高,否則會(huì )影響細胞的分離和回收。
4.離心:一般采用離心力為400g,時(shí)間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時(shí)要慢,要平穩。
5.取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時(shí),可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時(shí)大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養或檢測用。
三、分離純化細胞舉例
1.富含NK活性大顆粒淋巴細胞(LGL)的純化:按順序由下向上逐層加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五種不同密度的Percoll,如用10ml試管(或塑料管)分離,每層Percoll約1.2~1.5ml,初步從外周血中分離的PBMC細胞1×108懸于1ml培基中,按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細胞位于42.5%與45%Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。
2.純化淋巴母細胞:分別疊加50%和30%Percoll液。收取經(jīng)PHA(或其它抗原、有絲分裂原)刺激PBMC,或含有較高比例異型的PBMC(如腎綜合征出血熱患者),按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細胞為小淋巴細胞;兩層Percoll之間為淋巴母細胞,純度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死細胞。收獲淋巴母細胞可進(jìn)行表型、結構以及功能的研究。
四、人不同血細胞的漂浮密度
表 人不同血細胞的漂浮密度
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細 胞 漂浮密度 │ 細 胞 漂浮密度
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紅細胞 1.09-1.11 │淋巴細胞 1.052-1.077
粒細胞 │ B淋巴細胞 1.062-1.075
嗜酸性 1.09-1.095 │ T淋巴細胞 1.065-1.077
嗜中性 1.080-1.085 │ 淋巴母細胞 1.065-1.077
單核細胞 1.050-1.066 │自然殺傷細胞 1.050-1.070
血小板 1.030-1.060 │